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1、安放：生物安全柜应放在远离人员的活动、物品流动、门以及窗等可能会扰乱气流的地方。在生物安全柜后面、左右各留 30 c m空间，上端留 30~ 50 c m 空间，以便于维修和更换滤膜。
2、操作：使用生物安全柜操作时，检验人员手和背的伸入或取出时应缓慢以保证气流的完整性，并垂直于前端开口处。手或胳膊伸入柜中 1 m i n后开始操作以便于清洁皮肤表面。实验所需器材应一次性放入生物安全柜。尽量减少或限制操作人员手在安全柜中的进出次数。
3、实验材料的放置： A2生物安全柜前端开口处严禁被纸张、设备或其他物品覆盖。物品放入安全柜时，表面要用70% 乙醇檫拭。柜内应该备有一块浸过消毒液的毛巾，以便蘸取溅在柜的表面的传染性液滴。实验器材应按顺序从清洁的排放到污染的。污染的实验材料不应随意拿出柜外，操作者的手也不应频繁地进出安全柜。
4、操作和维护：大多数的 A2型生物安全柜设计成一天 24 h开机，调查发现连续开机有利于控制实验室灰尘和粒子。 A2型生物安全柜不用时可以关闭，但A2型生物安全柜在使用时要保持实验室空气平衡，因此一天中若有数个操作过程，其间不应中断运行。实验开始前 5 m i n就应启动安全柜，净化局部空气。使用中若出现任何故障均应及时向上级人员报告并请专职技术人员维修。
5、紫外线： A2型生物安全柜中不需要紫外线灯假如要用，每周要对灯管作清洁，除去尘埃，保证杀菌效果定期监测紫外线灯的辐射强度。要防止紫外线对眼睛和皮肤的灼伤